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人痰溶菌酶活性(45)

人痰溶菌酶活性的测定(45)

所需的材料

1. Buffer; 0.1 M Tris pH 7.5在25°C制备. 溶解12.70g Tris-HCl和2.36g Tris-base在900毫升H2O中. 测定pH值,必要时用0.1 M HCl或0.1 M NaHO到pH 7.5在25°C. 带1000毫升水.

2. Substrate suspension; 0.04% w/v. 称取40mg冻干溶菌微球菌放入200ml的锥形烧瓶中. 加入第1步制备的Tris 100ml.)搅拌,直到悬浮液均匀. 准备每日新鲜.

3. 酶解. 溶解1.Tris缓冲液中0毫克/毫升. 配制第二次稀释剂0.缓冲液中每毫升05毫克. 将酶溶液放在冰浴中冷藏.

过程

1. 平衡分光光度计至450nm,电池温度至25°C.

2. 分发3.0 ml底物悬浮液置于细胞中,并平衡至25°C.

3. 添加0.005毫升的0.05毫克/毫升溶菌酶溶液, 每隔1分钟搅拌并测定吸光度下降的速率. 减少率应在3 - 6分钟内呈线性. 

比活度计算

= 3卷.005 A = 450 nm T = 25°C光路= 1 cm

Î, 1%, 1 cm = 17.60 mg/ml = A280 × 0.568

单位    =      ∆A / min x 1000 ml
mg                  8.8 x 0.0025 mg

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