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阿尔法淀粉酶活性(89)

-淀粉酶活性的测定(89)

所需的材料
注:以下列出的所有化学品都可以从Sigma-Aldrich公司获得.

1. KPO4-NaCl buffer; 0.1 M pH 6.9在25°C,含0.01 M氯化钠. 溶解8.71克K2HPO4在500毫升水. 滴定到pH值6.9和0.1 m kh2po4 (6.8通用/ 500毫升水). 加入NaCl至0.01 M. 谨慎! 在步骤2和步骤3中使用通风罩和搅拌器/加热板.

2. Substrate solution; 1% soluble starch. 将1克溶于80ml水中,加热搅拌至ca. 90°C,冷却并调节体积至100毫升.

3. Color reagent; 44.0,5 -二硝基水杨酸. 溶解1 gm 3,5 DNSA于80ml.用搅拌ca加热5 M NaOH. 70°C. 加入30克酒石酸钠,搅拌至溶解. 冷却至室温,加入100毫升水. 储存在琥珀瓶. 室温下稳定30天.

4. Maltose standard; 0.01 M. 将36mg麦芽糖溶于10ml KPO4-NaCl缓冲液中.

5. 酶解. 将a淀粉酶稀释至0.05 mg/ml KPO4-NaCl缓冲液.

6. 准备以下稀释管适合加热在100°C.
 

mlPO4-NaCl 淀粉酶 ml μM 毫升的水
1测试 0.50 0.01 ml ----- ----- 0.40
2性病 0.5 ---------- 0.05 0.5 0.45


将所有管道置于25°C. 在0时刻加0.5毫升底物溶液放入1和6管中,孵育2分钟. 通过加1来停止反应.0ml显色试剂. 在温度块中以100°加热所有管10分钟. 冷却至室温,加2.每管5ml水. 让试管在室温下静置10分钟.

7. 读Abs vs. 空白在540 nm. 画出腹肌与腹肌. μ摩尔的麦芽糖. 确定坡度540/μM麦芽糖.

8. 具体活动的计算,即.e.在pH为6时,每毫克淀粉酶每分钟释放的麦芽糖为μM.9,
25°C,从斜坡开始.

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